Western blot 抗体稀释倍数怎么定

稀释倍数为什么总是影响这么大

一抗和二抗浓度过高时，最先出现的往往不是“更强信号”，而是背景抬升、非特异条带增多和膜面整体发灰。浓度过低时，又容易把原本就偏弱的目标蛋白进一步压没。

优化时不要只改一个数字

抗体倍数要结合孵育时间、封闭液类型和洗膜强度一起判断。相同抗体在不同样本和曝光体系中，合适的窗口可能差很多。

实用建议

先从说明书推荐范围中间值起步，再做 2 到 3 个稀释点并行比较。这样通常比一次次微调更快找到稳定区间。