qPCR 熔解曲线双峰的常见原因

双峰意味着什么

双峰往往说明体系中出现了两类不同产物：目标产物与非特异扩增产物，或目标产物与引物二聚体。

优先检查

• 退火温度是否过低
• 引物是否存在明显互补
• 模板是否污染
• 阴性对照是否也出现扩增

推荐动作

先提高退火温度并降低引物浓度，再观察峰形变化；若仍存在双峰，优先回到引物设计本身。