问题现象
目标条带和相邻条带距离太近，Marker 能跑出来，但样本条带分辨率不够，无法判断片段大小或切胶回收范围。
这类问题通常不是“有没有条带”，而是“分离条件不适合当前片段大小”。
常见原因
- 凝胶浓度不适合目标片段范围。
- 电压太高，条带跑得快但分辨率下降。
- 电泳时间太短，片段还没有拉开距离。
- 上样量过多，条带变宽。
- 目标片段本身大小差异太小，普通琼脂糖胶难以区分。
凝胶浓度怎么选
| 目标片段范围 | 建议胶浓度 | 说明 |
|---|---|---|
| 100-300 bp | 2.0%-2.5% | 适合小片段分辨 |
| 300-800 bp | 1.5%-2.0% | 常见 PCR 产物 |
| 800 bp-3 kb | 1.0%-1.5% | 常规片段 |
| 3-10 kb | 0.7%-1.0% | 大片段迁移更顺畅 |
如果两个片段只差几十 bp，普通 1% 胶往往很难分清，需要提高胶浓度、延长跑胶距离，或换更适合小差异片段的体系。
排查顺序
1. 先确认目标片段大小差异
如果两个片段相差很小，不要只靠延长时间解决。
先判断当前胶浓度理论上是否能分开这个大小范围。
2. 调整胶浓度
小片段分不开，通常提高胶浓度；大片段跑不开，则适当降低胶浓度。
胶浓度调错时，继续改变电压往往效果有限。
3. 降低电压并延长时间
高电压会让条带迁移更快，但发热和扩散也更明显。
需要分辨率时，可以降低电压、延长跑胶，让条带有更长距离拉开。
4. 减少上样量
样本太浓会让条带变粗，尤其是 PCR 产物量很高时。
分辨率不够时，可以先减少上样量，而不是只追求亮度。
切胶回收时怎么处理
如果两个条带靠得很近，切胶时不要切得过宽。
可以先优化电泳分离条件，再切胶；否则容易把相邻片段一起带入回收产物。
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本文用于科研实验排查与条件优化，不替代实验室 SOP、试剂说明书或医学判断。